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Gli svantaggi di elettroforesi del gel

Gli svantaggi di elettroforesi del gel

Elettroforesi del gel è una tecnica dove le molecole biologiche sono separati gli uni dagli altri e identificati in ricerche biologiche o diagnostica medica. Dal loro sviluppo nel 1970, queste tecniche sono state inestimabile nell'identificazione di geni (DNA) e prodotti del gene (RNA e proteina) di interesse per la ricerca. Negli ultimi anni, sono emerse le tecniche più recenti che danno una maggiore specificità e dettaglio su ciò che sta accadendo nei sistemi viventi. Mentre questi non hanno soppiantato le tecniche di elettroforesi e manipolazioni avanzate possono espandere l'attuabilità della tecnica, è importante rendersi conto che cosa latta di elettroforesi del gel e non può fare.

Electrophorresis ha limitato l'analisi dei campioni

Gli svantaggi di elettroforesi del gel

L'elettroforesi è specifico di qualsiasi tessuto che hai provato. Per esempio, se si esegue una macchia del Sud (un tipo di elettroforesi) su un tampone di guancia, sta guardando geni dalle cellule epiteliali della guancia e non altrove nel vostro corpo. A volte, questo può essere utile, ma i ricercatori sono frequentemente interessati in effetti più diffusi. Tecniche quali la ibridazione in situ (ISH) possono prendere una sezione di tessuto e analizzare l'espressione genica a ogni piccola area di quel campione. Così, i ricercatori possono guardare a ogni area del cervello in un campione con ISH, considerando che le tecniche di elettroforesi possono solo guardare alcune aree alla volta.

L'elettroforesi misure non sono Precise

Elettroforesi del gel può efficacemente separare le proteine simili con diversi pesi (si tratta di una tecnica chiamata Western blotting). Li può separare più precisamente attraverso una tecnica nota come elettroforesi 2d; Questo è comune in proteomica. Purtroppo, tutte le misure effettuate da questa tecnica sono semi-quantitativa al meglio. Al fine di ottenere la precisa massa (peso) delle proteine, spettroscopia di massa deve essere impiegata dopo che la proteina è stata purificata mediante elettroforesi. Inoltre, confrontando la quantità relativa di molecole diverse si basa sulla densità della banda (oscurità) di diverse macchie sul gel. Questo metodo ha un certo grado di errore, e campioni vengono solitamente eseguiti più volte per ottenere risultati di pulito.

Campione a partire sostanziale è richiesto

Gli svantaggi di elettroforesi del gel

L'elettroforesi è una tecnica di isolare e identificare visivamente diverse biomolecole. Ciò avviene facendo passare una corrente elettrica attraverso il gel per separare molecole cariche di pesi diversi. Se la molecola che ti interessa non è abbastanza comune, la band sarà praticamente invisibile e difficile da misurare. DNA e RNA può essere amplificato un po ' prima di eseguire l'elettroforesi, ma non è pratico per effettuare questa operazione con le proteine. Di conseguenza, un campione di tessuto grande è necessario per eseguire queste analisi. Questo può limitare l'utilità della tecnica, soprattutto nell'analisi mediche. È praticamente impossibile eseguire l'elettroforesi su campioni da una singola cellula; Immunohistochemistry e citometria a flusso sono più comunemente utilizzati per valutare la cella di espressione delle proteine. Una tecnica chiamata PCR è eccellente a misurare con precisione piccole quantità di RNA.

Solo alcune molecole possono essere visualizzati

L'elettroforesi è eccellente a separazione e identificazione di biomolecole di medie e grandi dimensioni. Tuttavia, molte delle molecole che i ricercatori desiderano guardare sono più piccoli; ioni, neurotrasmettitori e ormoni piccoli non è misurabile tramite l'elettroforesi. Questo è per due motivi: non reagiscono correttamente con la preparazione di elettroforesi (solitamente una tecnica chiamata SDS PAGE) e, anche se hanno fatto, sono troppo piccoli per separare correttamente e tornerei immediatamente fuori la parte inferiore del gel. Queste molecole sono invece misurate mediante tecniche quali l'Elisa (analisi enzima-collegata metologie) e RIAAs (test immunologici radio).

L'elettroforesi è basso Throughput

Elettroforesi del gel è generalmente bassa velocità effettiva, che significa che non produce dati soprattutto rapidamente. Elettroforesi di contrasto, dove si può guardare una piccola manciata di molecole di RNA in un momento, con la PCR (reazione a catena della polimerasi), che può valutare simultaneamente migliaia di campioni. Allo stesso modo, citometria a flusso può prendere le misure da migliaia di singole celle e fare correlazioni complesse, mentre l'elettroforesi sembra alle cellule in massa e non è possibile effettuare tali discriminazioni bene. PCR e flusso cytometry rappresentano rispettivamente i processi massicciamente paralleli e seriali, ed entrambi lontano superare le capacità di elettroforesi per generare dati di ricerca.